項目介紹：

透射電鏡(TEM)利用電子束作光源，用電磁場作透鏡，經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上，形成明暗不同的影像，TEM在中和物理學和生物學相關(guān)的許多科學領域都是重要的分析方法，如基礎醫(yī)學研究、病毒學、材料科學、以及納米技術(shù)、半導體研究等等。透射電子顯微鏡的分辨率比光學顯微鏡高的很多，分辨力可達0.2nm，200-200k倍之間連續(xù)可調(diào); 可以用于觀察樣品的精細結(jié)構(gòu)，甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結(jié)構(gòu)。

　　透射電鏡(TEM)，全稱透射電子顯微鏡，是把經(jīng)加速和聚集的電子束投射到超薄切片的樣品上(通常70-90nm)，電子與樣品中的原子碰撞而改變方向，從而產(chǎn)生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關(guān)，因此可以形成明暗不同的影像，影像將在放大、聚焦后在成像器件上顯示出來。是一種高分辨率(0.1nm-0.2nm)、高放大倍數(shù)(0.2K-600K)的顯微鏡。是觀察和研究物質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的強有力工具。透射電鏡在細胞生物學、組織學、病毒學、病理學、分子生物學、材料科學等諸多領域具有廣泛應用。可以觀測動物植物細胞超微結(jié)構(gòu)，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、葉綠體、液泡、細胞內(nèi)生細菌等結(jié)構(gòu)及病理變化。可以觀測病毒顆粒、外泌體、病原微生物、各類細菌真菌、納米材料及納米顆粒、晶體結(jié)構(gòu)。

實驗流程：

　　包埋-制片-拍照

結(jié)果展示：

送樣運輸要求：

以下所有樣本必須盡量新鮮，固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!

1、動物組織樣本

①1-3min內(nèi)取樣，取樣組織2mmX2mm大小，盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定，后續(xù)實驗無法完成，務必請重視此過程

②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。

③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。

④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時樣本可保存1個月左右

2、植物組織樣本

①取材要求同動物組織樣本。

②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底，如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內(nèi)，組織不能漂浮在固定液表面。

3、細胞樣本

貼壁細胞：

方法一：

①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基，加入2.5%的常溫戊二醛固定液。

②常溫固定5min左右，用細胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細胞，切記不要反復刮，避免細胞刮破。

③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內(nèi)，放入離心機(不超過3000轉(zhuǎn))，離心2min左右，細胞團要有綠豆大小。

④棄固定液后加新的電鏡固定液，把細胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。

⑥室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

方法二：(對細胞形態(tài)沒有要求的)

①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基，加入胰酶。

②胰酶消化好后(時間不宜過長)，用培養(yǎng)基終止消化，用吸管把細胞吹下來。吸入離心管，離心(不超過3000轉(zhuǎn))，2min左右，細胞團要有綠豆大小。

③棄上清，加入2.5%的常溫戊二醛固定液，把細胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。

④室溫避光固定30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細胞：離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

4、細菌樣本

長于固體培養(yǎng)基的細菌：連帶著培養(yǎng)基一起挑下細菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存， 4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

懸浮細菌孢子等：離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

5、病毒

破碎組織細胞，粗離心去除細胞碎片取上清，超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒，遠距離-80°凍存運輸，近距離4°保存運輸，盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。

6、外秘體囊泡等

客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集，用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮，遠距離-80°凍存運輸，近距離4°保存運輸，盡快制片做負染后及時電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解，樣品越新鮮越好，最好數(shù)小時內(nèi)完成滴片負染，否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)

7、納米材料等無機材料

直接準備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮，常溫保存運輸即可(需要超聲的備注)。做負染后電鏡觀察拍照。

注意事項：

1.拍照需要求簡潔清楚，有側(cè)重點。需附參考圖或參考文獻(如有特殊要求請?zhí)崆皞渥⒄f明)

2.拍照倍數(shù)由參考文獻效果圖來確定(不同機器不同廠家倍數(shù)標準不同，不能互通參考)

3.圖片本身左下角附有拍照倍數(shù)(X-K 單位千倍)，右下角附有標尺(十格總長即為標尺所注長度)